Инструкция к практическому занятию
Гидролиз нуклеопротеинов. Качественные реакции на составные части нуклеопротеинов
Принцип метода: в результате процесса кислотного гидролиза дрожжей образуется смесь составных компонентов сложных белков - нуклеопротеинов: пентоз, фосфорной кислоты, азотистых оснований и белка.
Материальное обеспечение: гидролизат дрожжей, раствор сульфата меди, раствор гидроксида натрия, пробирки, штативы.
Ход работы. Студенты получают для работы готовый гидролизат.
1. Биуретовая проба на белок.
Принцип метода: В щелочной среде раствор белка при взаимодействии с ионами меди приобретает сине-фиолетовую окраску. Этой реакцией открывают пептидную связь в белках.
Материальное обеспечение: гидролизат дрожжей, раствор сульфата меди, раствор гидроксида натрия, пробирки, штативы.
Ход работы: к 10 каплям гидролизата дрожжей добавляют 10 капель 10% раствора щелочи и 1 каплю 1% раствора сульфата меди (2+). Через 15 минут появляется фиолетовое окрашивание.
2. Реакция Молиша на пентозы.
Принцип метода: При взаимодействии концентрированной серной кислоты с пентозами происходит их дегидратация и образуется фурфурол, дающий с тимолом продукты конденсации красного цвета.
Материальное обеспечение: гидролизат дрожжей, спиртовый раствор тимола, концентрированная серная кислота, пробирки, штативы.
Ход работы: К 10 каплям гидролизата прибавляют 3 капли спиртового раствора тимола и по стенке пробирки осторожно(!) добавляют 10 капель концентрированной серной кислоты. При встряхивании на дне пробирки образуется продукт красного цвета.
1. Молибденовая проба на фосфорную кислоту.
Материальное обеспечение: гидролизат дрожжей, молибденовый реактив, пробирки, штативы, водяная баня.
Ход работы: к 10 каплям гидролизата приливают 20 капель молибденового реактива, жидкость окрашивается в синий цвет.
ВЫВОДЫ:
Инструкция к практическому занятию “Определение йода в вытяжке щитовидной железы”.
Принцип метода: При разрушении тиреодина образуется йодид калия,из которого йод легко вытесняется йодатом калия. Вытеснение йода из соли йодистоводородной кислоты является окислительно-восстановительной реакцией, в которой йодид калия служит восстановителем, а йодат калия (остаток йодноватистой кислоты) – окислителем. Выделившийся йод обнаруживают с помощью крахмала (синее окрашивание) в кислой среде:
5К1 + К1О3 + 3Н2 SО4 = 312 + 3К2 SО4 + 3Н2 О.
Материальное обеспечение: гидролизат щитовидной железы , 2% раствор йодида калия, 10% раствор серной кислоты, 1% раствор крахмала, пробирки, пипетки, штативы.
Ход работы:
Реакция проводится с готовым гидролизатом щитовидной железы. В пробирку 1 налейте 0,5 мл контрольного раствора, в пробирку 2 - 0,5 мл гидролизата щитовидной железы, добавьте 0,1мл 2% раствора йодата калия и 0,5 мл 10% раствора серной кислоты до появления красно-желтого окрашивания в результате выделения свободного йода. К полученному раствору добавьте 5 капель 1% раствора крахмала. Выделившийся свободный йод дает синее окрашивание с крахмалом.
ВЫВОДЫ.
Инструкция к практическому занятию «Качественные реакции на адреналин»
Реакция с хлорным железом.
Принцип метода. Адреналин обладает слабощелочной реакцией, легко окисляется на воздухе с образованием адренохрома, вследствие чего раствор окрашивается в красный цвет. При взаимодействии с нитритом наблюдается желто-оранжевое окрашивание, с диазореактивом – красное и с хлорным железом – зеленое. Реакция с хлорным железом характерна для пирокатехинового кольца, входящего в молекулу катехоламинов.
Материальное обеспечение: адреналин гидрхлорид 0,1% раствор, хлорное железо, !% раствор, едкий натр, 10% раствор, сульфаниловая кислота, 0,5% раствор, нитрат натрия, 0,5% раствор, пипетки, пробирки, штативы.
Ход работы. В пробирку наливают 10 капель раствора адреналина и добавляют 1 каплю хлорного железа. Наблюдается зеленое окрашивание, вследствие присутствия пирокатехина в молекуле адреналина. Добавив 3 капли 10% раствора едкого натра, наблюдают вишнево-красное окрашивание.
Диазореакция.
Принцип метода. При взаимодействии диазореактива с адреналином жидкость окрашивается в красный цвет вследствие образования сложного соединения типа азокрасителя.
Ход работы. К 6 каплям 0,5% раствора сульфаниловой кислоты прибавляют 6 капель 0,5% раствора нитрита натрия (смесь диазореактива), 10 капель раствора адреналина и 3 капли 10% раствора едкого натра. Жидкость окрашивается в красный цвет.
ВЫВОДЫ.
Инструкция к практическому занятию: «Исследование мочи при диагностике сахарного диабета».
Принцип работы: важную роль в диагностике сахарного диабета играет исследование мочи пациента. Обнаружение в моче патологических компонентов: глюкозы и кетонових тел с высокой степенью вероятности позволяет подтвердить диагноз.
В модельних пробах мочи определите наличие:
- глюкозы;
- кетонових тел.
Проанализируйте полученные данные и сделайте выводы.
Материальное обеспечение: пробы мочи, тест-полоски для определения глюкозы, 10% раствор щелочи, раствор нитропруссида натрия, ледяная уксусная кислота.
Ход работы:
1. Определение содержания глюкозы в моче при помощи тест-полосок.
Опустите тест-полоску в пробирку с анализируемой пробой мочи, затем по шкале определите уровень глюкозы в моче.
2. Качественная реакция на ацетон (проба Легаля)
Принцип работы. Ацетон и ацетоуксусная кислота в щелочной среде образуют с нитропруссидом натрия оранжево-красное окрашивание.
В пробирку наливают 5 капель мочи, 5 капель 10% раствора щелочи и 5 капель свежеприготовленного нитропруссида натрия. Появляется оранжево-красное окрашивание, которое после добавления 10 капель ледяной уксусной кислоты переходит в вишнево – красное окрашивание. Проба положительна при концентрации кетоновых тел в моче более 1 ммоль/л
Клинико-диагностическое значение.
Гиперкетонемия и кетонурия наблюдаются при сахарном диабете, голодании, гиперпродукции гормонов – антагонистов инсулина.
Результаты внесите в таблицу.
|
показатель |
проба №1 |
проба №2 |
проба №3 |
|
глюкоза |
|
|
|
|
кетоновые тела |
|
|
|
Объясните полученные результаты и сделайте выводы:
ВЫВОД:
Инструкция к практическому занятию.
Работа №1 «Количественное определение белка биуретовым методом».
Принцип метода: Метод основан на способности пептидных связей белков образовывать с ионами Си+2 в щелочной среде соединение фиолетового цвета, интенсивность которого пропорциональна содержанию белков в растворе.
Материальное обеспечение: сыворотка крови, стандартные растворы белка, физ. раствор, биуретовый реактив пипетки, пробирки, штативы, ФЭК.
Ход работы:
1. Для построения калибровочной кривой смешайте 1 мл стандартного раствора белка и 5 мл биуретового реактива.
2. В пробирку налейте 1 мл сыворотки крови.
3. Добавьте 5 мл биуретового реактива.
4. Все пробы аккуратно перемешайте круговыми движениями и оставьте на 15 минут.
5. Через 15 минут раствор фотоколориметрируйте на ФЭКе при зеленом светофильтре λ=540-560 нм против контроля.
6. Контроль: смешивают 1 мл физ. Раствора и 5 мл биуретового реактива, далее обрабатывают, как опыт.
7. В тетрадь запишите оптическую плотность (Е) раствора .
8. Постройте калибровочную кривую исходя из концентраций белка: 40 г/л, 60 г/л, 80 г/л, 100 г/л.
9. Концентрацию белка в сыворотке определите по полученной калибровочной кривой.
Нормальное содержание белка в сыворотке крови составляет 65-85 г/л.
Калибровочная кривая:
Е
С (г/л)
Результаты:
ВЫВОД:
